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2020安徽知识问答备考资料-PCR技术基本原理、类型及临床运用

来源:中公安徽卫生人才网 时间:2020-11-09 16:30:06

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中公安徽卫生人才网为大家介绍PCR技术基本原理、类型及临床运用,希望对大家的考试有所帮助!

2020年新型冠状病毒肆虐,导致疫情在全球范围内蔓延,严重威胁了人类的生命安全。其确诊的方法是对患者的咽拭子、痰液、下呼吸道分泌物或血液进行新型冠状病毒核酸检测。这也使得核酸检测成为今年检验面试的热点,而临床上核酸检测的主要方式就是PCR技术。我们一起来看下什么是PCR技术及其类型与临床运用,这类型的题如何解答。

首先关键是答出PCR的定义及基本原理。

PCR即聚合酶链式反应,是模拟生物体内DNA的复制过程,在体外(试管内)通过酶促反应合成特异DNA片段的方法。其基本原理和过程与细胞内DNA的复制相似,由变性、退火和延伸3个步骤构成。

(1)高温变性:待扩增的靶DNA片段在高于其熔点温度(Tm)的条件下(94~95℃),DNA双螺旋结构中的氢键断裂而解螺旋,形成两条单链分子,这两条单链分子即为扩增反应的模板。

(2)低温退火:将温度降低至寡核苷酸引物的熔点温度以下(40~70℃),则引物与互补的单链DNA模板互补结合,形成杂交链。

(3)适温延伸:将温度升至72℃,根据碱基互补配对的原则,在DNA聚合酶存在的条件下,杂交链不断延伸,形成新的DNA双链。

变性、退火和延伸构成PCR的一个循环,每一个循环完成后,一个分子的模板双链DNA被复制为两个分子。每个循环所产生的DNA片段又成为下一个循环的模板。每一次循环都使靶DNA的拷贝数扩增一倍,PCR产物以2的指数形式增长(n为循环次数)。以达到检测目的。

在讲解步骤和原理时如果无法记住具体温度及过程可以简便回答三个步骤即高温变性、低温退火、适温延伸。之后再补充临床意义。类型和临床意义可以也可以总结式分开回答,或者入下文一一对应。

随着PCR技术在临床及科研领域的广泛应用,为适应不同的检验目的,已发展出多种以PCR为基础的相关技术。主要有多重PCR,临床上常用于分型或鉴定,如个体识别、病原体分型或法学鉴定。序列特异PCR,该技术主要用于HLA基因型的检测。由于假阳性率较高,临床应用较少。逆转录PCR,RT-PCR在临床上主要用于RNA病毒的检测,如这次新冠病毒,此外还被广泛用于cDNA克隆、cDNA探针合成及基因表达分析等。

在答题过程中如果发现内容过少,可以添加新冠基本内容在前序或后续部分,如本文开头,丰富答题结构。

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